糖化血紅蛋白（hemoglobin A1c，HbA1c）是葡萄糖與血紅蛋白β珠蛋白鏈末端纈氨酸殘基結合生成的穩定化合物，在糖尿病篩查、診斷及療效監測中起重要作用。衛生部臨檢中心室間質評回報顯示（www。clinet。com。cn），2018年總共1 784家實驗室，按照方法學排序依次為離子交換高效液相色譜法1 284家（71。8%），免疫比濁法247家（13。8%），硼酸鹽親和高效液相色譜法122家（6。8%），酶法54家（3。0%），毛細管電泳9家（0。5%），低壓液相色譜法7家（0。4%），POCT裝置13家（0。7%），其他47家（2。6%）。本文概述離子交換高效液相色譜法、免疫比濁法、硼酸鹽親和高效液相色譜法、酶法及電泳法在其測定中的發展及優缺點。
1．離子交換高效液相色譜法：
其原理為在選定濃度洗脫液的離子強度條件下，由於血紅蛋白中各組分所帶電荷不同，透過陽離子交換樹酯分離。Allen等在1958年首先明確地證明了人類血紅蛋白的異質性，當時用陽離子交換柱IRC-50將A1a、A1b和A1c分離。1966年有研究用陽離子交換柱Bio-Rex 70分離了HbA1c，並發現其約佔6%。陽離子交換色譜法是較早應用於糖化血紅蛋白檢測的方法，70年代發展為成熟的高效液相色譜法，之後陸續出現了多個全自動高效液相色譜糖化檢測儀。糖尿病控制及併發症試驗和英國前瞻性糖尿病研究奠定了此方法結果與糖尿病併發症的相關性，經過近50年的發展，高效液相色譜法已經有非常成熟的技術與多種商業化全自動檢測儀，併成為現在實驗室應用較寬廣的方法。此方法操作方便、結果準確、快速，缺點是易受到異常血紅蛋白乾擾，隨著檢測技術改進與提高，很多廠家為了應對異常血紅蛋白的干擾，推出了糖化血紅蛋白檢測的變異模式，減少異常血紅蛋白的干擾。
2．硼酸鹽親和高效液相色譜法：
其原理為使用硼酸親和層析凝膠柱，硼酸具有與糖基化血紅蛋白分子的順位二醇基可逆結合反應的性質，致使糖基化血紅蛋白選擇性地結合於柱上，而非糖化血紅蛋白被洗脫而分離測定。硼酸親和層析法在80年代就有報道，具有高效的分離和定量糖基化血紅蛋白的能力，並顯示硼酸親和方法與陽離子交換樹脂小柱法和比色法相關性良好。由於此方法檢測總糖基化血紅蛋白，所以HbA1c結果為計算結果。硼酸親和層析法由於受到異常血紅蛋白的干擾較小，在既往研究中通常被用作參比方法。
3．免疫法：
20世紀80年代開始製備HbA1c單克隆抗體並應用於HbA1c的檢測，90年代開始出現免疫法的商業試劑盒。現代的免疫法所用抗體大部分以血紅蛋白鏈糖基末端的4個氨基酸殘基作為抗體識別位點，操作簡單、方便、快速，能夠避免大部分異常血紅蛋白乾擾，但是免疫法不能識別異常血紅蛋白。2018衛生部臨檢中心資料顯示，免疫法和酶法CV高於離子交換高效液相色譜法。
4．酶法：
21世紀開始有報道酶法檢測HbA1c。酶法測定HbA1c的基本原理為全血樣本用溶血劑處理後，其中的血紅蛋白與試劑中的蛋白酶反應，切斷血紅蛋白的β鏈N末端的糖化二肽，生成的糖化氨基酸片段在果糖氨基酸氧化酶的催化下生成H2O2，透過與色原反應在700 nm吸光度變化而得出HbA1c濃度。酶法檢測原理存在侷限性，單試劑檢測試劑盒只能適用於一定的血紅蛋白濃度範圍。酶法在實驗室應用較少，此方法也不能識別異常血紅蛋白。
5．電泳法：
較早應用於HbA1c檢測的電泳法可追溯到1965年，有學者用汞基苯甲酸鹽對血紅蛋白進行前處理，澱粉凝膠電泳發現有一條快速帶HbA1c。1968年Rahbar用氯汞基苯甲酸鹽處理過的澱粉電泳（巴比妥緩衝液pH。8。6）時發現，在糖尿病患者溶血液中，存在一個快速移動的條帶，從真正意義上發現了HbA1c與糖尿病的相關性。Rahbar等對糖尿病患者血液中的這種異常血紅蛋白用電泳法做了進一步的研究，並證明了這種血紅蛋白即為HbA1c。70年代開始用等電聚焦電泳來檢測HbA1c，這一技術相較於當時的陽離子交換色譜法來說，簡單省時，且條帶分離更清晰，還能夠分離血紅蛋白變異體，解析度更高。80年代改進的測定HbA1c的電泳方法，用自動掃描密度法測定HbA1c總量，重現性好，與高效液相色譜法有良好的相關性，還能分辨血紅蛋白S和C及其糖基化變異組分，使HbA1c的定量更加準確。20世紀90年代出現了商業化的瓊脂糖電泳法試劑。
隨著糖化血紅蛋白標準化程度的提高，瓊脂糖電泳結果的精度以及檢測通量不能完全滿足實驗室和臨床要求，不適用於HbA1c的大批次檢測。90年代出現了商業化的毛細管電泳HbA1c檢測系統，具有快速，精密度高，敏感性高等特點，是臨床實驗室測定HbA1c的一種有價值的分析工具。毛細管電泳法不受大部分異常血紅蛋白的干擾，可用於異常血紅蛋白的定量和定性分析。2012年首先報道了全自動毛細管電泳儀檢測HbA1c的效能評價，此技術實現了毛細管電泳檢測HbA1c的標準化與高通量，各項效能指標完全滿足實驗室和臨床要求。近年來，毛細管電泳技術不斷髮展，用於檢測的各項效能指標也不斷提升，特別是管間差、檢測速度和精密度等指標。