生物監測,哪些時候需要做陽性對照或陰性對照?
作者:何珉
這是舊話新提了。基層醫院的消毒供應中心或者檢驗科,對於滅菌生物監測做對照的意義和處理方法一直總有疑問,今天我們就專門聊一聊陽性對照和陰性對照的話題。
一)
行業規範怎麼說
一般說來壓力蒸汽滅菌以後做生物監測,需要既做陽性對照也做陰性對照。消毒供應中心的行業標準WS 310-3。2009裡面的附錄A“壓力蒸汽滅菌的生物監測方法”相關條款是這樣規定的:
A1 ……標準生物監測包置於滅菌器排氣口的上方或生產廠商建議的滅菌器內最難滅菌的部位,
並設陽性對照和陰性對照
。如果一天內進行多次生物監測,且生物指示劑為同一批號,
則只設一次陽性對照即可
。
A3 結果判定:陽性對照組培養陽性,陰性對照組培養陰性,試驗組培養陰性,判定為滅菌合格。陽性對照組培養陽性,陰性對照組培養陰性,試驗組培養陽性,則滅菌不合格;同時應進一步鑑定試驗組陽性的細菌是否為指示菌或是汙染所致。
二)
陽性對照可以發現什麼問題
何謂陽性對照?
陽性對照是用一種效果明確的手段來檢測結果的有效性。
簡單來講對於生物監測,培養一支沒有經過滅菌的生物指示劑就是陽性對照。說“效果明確”,是因為這支陽性對照管經過培養一定會顯示出陽性的結果。如果陽性對照管都沒有培養出陽性,說明要麼是這一批次的生物指示劑,要麼是培養閱讀器出了問題,兩者必居其一。在種情況下,即使試驗管培養出來是陰性的結果也不能算數。
有一個生動的例子,是我聽一位消毒供應前輩專家講的
。
好多年前去中部某省檢察供應室,當地老師很自豪地告訴專家說她們供應室生物監測從來沒有出現過陽性,次次都合格。然而專家一看該供應室當時常規用甲醛燻蒸消毒,而待用的生物指示劑都放在供應室裡頭,因而這些指示劑的細菌在進入壓力蒸汽滅菌鍋之前早已被甲醛殺死,怪不得從沒顯示陽性。再一查,這個供應室生物監測從不設陽性對照,因而專家檢查前就都沒有發現這個問題了。回想之前的滅菌結果,真的使人後怕!
三)
自含式生物指示物可免除陰性對照
何謂陰性對照?
與陽性對照一樣,也是用一種效果明確的手段來檢測結果的有效性。
只不過這裡說的“效果明確”指的是陰性對照組培養的結果必須是陰性。這是因為傳統的生物監測用的是菌片,需要在超淨臺裡面做接菌、轉染、塗布等一系列無菌操作。在這個過程中菌片都有可能被汙染。為了排除試驗組做出來的陽性結果不是因為壓力蒸汽滅菌沒有殺死預先塗布的嗜熱脂肪桿菌芽孢,而是操作員手上、超淨檯面上的細菌,比如常見的大腸桿菌或者金黃色葡萄球菌,將無嗜熱脂肪桿菌芽孢的“菌片”平行地做一次培養,以保證操作本身的無菌性。
因此當生物指示物從“菌片式”升級到“自含式”,不需要無菌操作時,陰性對照就可以省略了。
不過在東北某省也碰到過透過給自含式生物指示物做陰性對照發現問題的例子。我們知道現在的生物培養閱讀器用的是“空氣浴”來加熱,而那次當地醫院圖省事用水浴鍋加熱。水浴鍋很容易滋生細菌,汙染了試驗管。後來就是透過陰性對照的方法發現了這個問題,再透過對細菌的鑑定,果然排除了嗜熱脂肪桿菌芽孢。
四)
綜上所述
設定陽性對照和陰性對照是常用的排除干擾的實驗設計方法。具體到生物監測陽性對照一定要做,自含式生物指示物一般可以省去陰性對照,但也要留意可能帶來的誤判。
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圖文編輯:小小牧童
審稿:孫慶芬 趙靜