2月3日，音樂人趙英俊因肝癌醫治無效在北京病逝，年僅43歲；同月27日，一代“黃金配角”香港知名演員吳孟達也因肝癌去世，享年68歲。
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在我們為他們的離去感到震驚與惋惜的同時，也不禁感嘆肝癌的高發性。
在我國，肝癌發生最常見的原因是感染乙型肝炎病毒（HBV）後引起
慢性乙型肝炎
，進而轉變為肝硬化、肝癌。據統計，全球每年因慢性乙型肝炎引起肝硬化和肝細胞癌的死亡人數超過88。7萬人。［1］
慢性乙型肝炎難以被治癒已是公認的事實。
大多研究認為這與肝細胞核內HBV共價閉合環狀DNA（cccDNA）過長的半衰期有關，也是HBV難以清除的主要原因。［2］因此，肝內檢測cccDNA對評估抗病毒治療療效和治療終點具有重要意義。
但在實際應用中，cccDNA的檢測十分困難，通常需要進行肝組織活檢，具有創傷性，難以在臨床上推廣應用。如何真實地評判肝細胞內cccDNA的水平和轉錄活性，成為臨床亟待解決的問題。
近年來，
血清HBV RNA
一步一步走進了人們的視野。多項研究表明，
血清HBV RNA可以真實反映cccDNA轉錄活性狀態，對cccDNA的檢測、輔助臨床停藥管理、最佳化慢性乙肝患者的治療策略和臨床轉歸等方面都具有重要意義，
近日已有HBV RNA檢測試劑獲批用於臨床，加速了該新指標臨床應用
。今天檢驗君就和大家聊一聊HBV RNA與cccDNA的那些事。
血清HBV RNA是如何走進人們視野的？
1996年，德國科學家K ck和他的同事在研究HBV能否感染人外周血單核細胞時，發現患者血清的遊離病毒存在HBV RNA。［3］這也是首次在慢性乙肝患者外周血中檢測到HBV RNA的存在。
隨後，更多研究者在慢性乙肝患者體內發現了HBV RNA的存在，並試圖探究其臨床意義。
2006年，Akinori Rokuhara等人比較了慢性乙肝患者抗病毒藥物治療前後血清HBV RNA水平與HBV DNA、HBV核心相關抗原（HBVcrAg）水平的變化，透過梯度離心的方法證明
慢性乙肝患者血清中的HBV RNA存在於由病毒包膜包被的病毒顆粒中
。
那麼，血清中的HBV RNA是以何種形式而存在，有何特徵？
HBV RNA存在形式及組分
近年來，國內外學者們對HBV RNA的研究層出不窮，並相繼發現這些
HBV RNA實質上是核衣殼內未經逆轉錄的前基因組RNA（pgRNA）
，這些pgRNA和鬆弛環狀DNA（rcDNA）一樣，存在於成熟病毒顆粒的核衣殼內，因此，將這種病毒顆粒稱之為“
HBV RNA病毒樣顆粒
”［4，5］。
北京大學醫學部病原生物學系魯鳳民教授研究團隊在慢性乙肝患者體內檢測到大量HBV RNA，並使用NP-40和蛋白酶K處理、蔗糖密度梯度離心法、電子顯微鏡、Northern雜交、多重PCR以及5‘Race 技術等多種檢測技術，
揭示了血清中的HBV RNA實質就是存在於核衣殼內未完成或部分完成逆轉錄的pgRNA
。［6］隨後多項研究同樣證明血清中HBV RNA實質就是pgRNA。［7］
看到這裡，相信大家已經對HBV RNA有了初步的瞭解了。可HBV RNA與肝內cccDNA究竟有何聯絡？
HBV RNA為何可準確反映肝內cccDNA轉錄活性？
原來，在HBV感染過程中，每個感染肝細胞記憶體在5~50複製cccDNA，作為pgRNA的原始模板，cccDNA會轉錄為pgRNA，而pgRNA是病毒逆轉錄及翻譯HBV聚合酶和核心蛋白的模板，［8］在核衣殼內聚合酶作用下，pgRNA進行逆轉錄，轉化為rcDNA，然後與病毒蛋白整合成完整的HBV釋放到細胞外。［9］
由於pgRNA是HBV病毒顆粒cccDNA直接轉錄生成，所以理論上HBV RNA的水平能夠反映cccDNA的水平和轉錄活性
。近年來多項研究表明，在基線和抗病毒治療過程中，血清HBV RNA水平依舊能反映肝組織中cccDNA的狀態，
是cccDNA可靠的臨床替代標誌物
。
Giersch等人透過定量檢測血清中的pgRNA，並利用了人源化的HBV感染小鼠進行研究，發現血清pgRNA與肝內的cccDNA水平呈顯著性相關，指出血清pgRNA可以作為一個實用的臨床替代標記物來評估HBV感染患者肝內持續存在的cccDNA轉錄活性。［10］
上海復旦大學附屬華山醫院感染科主任張文宏教授團隊研究表明，血清HBV RNA水平的確能反映cccDNA的轉錄活性，HBV RNA可以作為慢性乙肝患者功能性治癒的新指標。［11］
南方醫科大學南方醫院感染科的孫劍教授、侯金林教授團隊研究發現，血清HBV RNA中rtM204I/V（LAM耐藥突變位點）百分比與配對肝活檢組織cccDNA中rtM204I/V百分比呈顯著正相關，表明血清HBV RNA可作為cccDNA序列組成的替代標誌物。［12］
Shuya Matsuda等人對181例感染患者的血清HBV RNA進行了定量檢測，探究其與臨床特徵以及HBV標誌物的關係，並在接受抗病毒治療的患者中同時進行了HBV RNA / HBV DNA測序。結果表明，血清HBV RNA可以反映cccDNA轉錄活性，並與HBcrAg有較好的相關性，HBV RNA的動態變化，有助於瞭解HBV cccDNA在肝臟中的轉換過程。［13］
……
這一系列研究都表明，血清HBV RNA對反映真實cccDNA轉錄活性狀態具有重要意義。即使在抗病毒治療HBV病毒顆粒合成被抑制，
血清無法檢測出HBV DNA時，幾乎所有患者血清HBV RNA仍然檢出陽性
。
作為病毒複製模板cccDNA的直接轉錄產物，HBV RNA的確能很好反映HBV cccDNA 的轉錄活動狀態，有力補充現有“經典指標”HBV DNA和HBsAg的不足，可更加真實地反映慢乙肝患者病情進展和抗病毒治療效果，指導臨床治療和判斷預後。
結語
隨著對HBV RNA研究的不斷深入，人們發現HBV RNA與慢性乙肝患者病情進展有著密切的關係，對臨床指導意義日益受到臨床醫生的廣泛關注和認可。以病毒HBV RNA為藥物作用靶點和療效評估指標的乙肝新藥大部分也已進入臨床實驗階段，將在未來不久便能造福廣大慢性乙肝患者。此外，近日國家藥監局（NMPA）已批准HBV RNA檢測試劑應用於臨床檢測，我們有理由相信實現徹底消除慢性乙肝的目標已不再遙遠。
參考文獻：
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［10］ Giersch K， Allweiss L， Volz T， et al。 Serum HBV pgRNA as a clinicalmarker for cccDNA activity。 J Hepatol。 2017 Feb；66（2）：460-462。
［11］ Wang J， Yu Y， Li G， et al。 Relationship between serumHBV-RNA levels and intrahepatic viral as well as histologic activity markers inentecavir-treated patients［J］。 Journal of hepatology， 2018， 68（1）： 16-24。
［12］ Hong X， Hu J。 Serum HBV RNA Composition Dynamics as Marker for Intrahepatic HBV cccDNA Turnover ［published online ahead of print， 2020 Apr 22］。 J Med Virol。 2020；10。1002。
［13］ Matsuda S， Maekawa S， Komiyama Y， et al。Deep sequencing analysis of serum hepatitis B virus-RNAduring nucleot（s）ide analogue therapy。 Hepatol Res。 2021Jan；51（1）：39-50。
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編輯：唐強虎 審校：方琪