抗腫瘤中草藥:龍膽草

抗腫瘤中草藥:龍膽草

龍膽是多年生草本植物,根莖相對較短,根系屬鬚根系,呈密生狀態,鬚根細長,多至數十條,根呈黃白色,長50釐米左右,莖直立單生或叢生,一般每年8~9月間開花,一個多月後結果,種子為褐色條狀。

目前國內化妝品植物原料應用的較多的是以提取物形式加入,由於工藝的限制,提取物有效成分含量低,功效無法保證,且提取過程會新增較多醇類,違背了天然原料的初衷。以龍膽草為發酵底物,利用微生物的發酵代謝作用,以龍膽苦苷為評價指標,對龍膽草進行深層次的加工製備成龍膽酵素,為豐富龍膽草資源的化妝品應用及酵素新產品的開發提供理論依據

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基本資訊

抗腫瘤中草藥:龍膽草

龍膽的根莖及根經過乾燥,都可以入藥,具有瀉肝膽實火的功效。

性味:

味苦,性寒。

歸經:

歸肝、膽經。

功效:

清熱燥溼,瀉肝膽火。

抗腫瘤中草藥:龍膽草

主治

用於清熱燥溼,瀉肝膽火。用於溼熱黃疸,陰腫陰癢,帶下,溼疹瘙癢,肝火目赤,耳鳴耳聾,脅痛口苦,強中,驚風抽搐。

相關配伍

1、傷寒發狂:草龍膽為末,入雞子清、白蜜,化涼水服二錢。(《傷寒蘊要》)

2、蛔蟲攻心刺痛,吐清水:龍膽一兩,去頭銼,水二盞,煮一盞,隔宿勿食,平旦頓服之。(《聖惠方》)

|功效成分

環烯醚萜苷類化合物

龍膽中含有大量的環烯醚萜苷類化合物,其中包含龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、當藥苷、馬錢苷酸、6′-O-葡萄糖龍膽苦苷、斷氧化馬錢子苷、2′-(2,3-二羥基苯甲醯)-當藥苷、2′-(2,3-二羥基苯甲醯)-龍膽苦苷。馮波首次從龍膽中分離得到 8-表馬錢子酸、6′-O-βD-吡喃葡萄糖基龍膽苦苷。關皎等從龍膽中鑑定出 rindoside、trifloroside。周豔麗等首次從植物中分離得到天目地黃苷A、大花木巴戟苷C、地黃新苷C、6-酮基-8-乙醯鉤果草苷、天目地黃苷 E、齒葉玄參苷 A、6,7-去氫-8-乙醯鉤果草苷、地黃新苷B、3′-Oβ-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷。

黃酮類化合物

龍膽中含有多種黃酮類成分,主要有異葒草素、7-O-葡萄糖-異葒草素、4′-O-葡萄糖-異葒草素、異牧荊素、3′-O-葡萄糖-異牧荊素。劉明韜等從龍膽中鑑定出山奈酚。關皎等從龍膽中鑑定出三葉苷、槲皮素。

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酮類化合物

龍膽中含有多種酮類成分,主要有 1,3,7,8-四羥基口山酮、1,3,6,7-四羥基酮、1,3,7-三羥基-4,8-二甲氧基酮、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-3,7,8-三羥基酮。周豔麗等發現acremoxanthone D、oliganthaxanthone B、 oliganthaxanthone A、polyhongkongenosideA、sporormielloside、artomandin、pinetoxanthone、1,5-dihydroxy-2,3,4-trimethoxyxanthone、bannaxanthoneⅠ。還有芒果苷等化學成分。

三萜類及其他化合物

龍膽中含有3-O-棕櫚酸酯高根二醇、2α-羥基-熊果酸、α-香樹素、3-O-乙醯氧基熊果醇、3-O-棕櫚酸酯高根二醇、熊果醛、沒食子酸乙酯、水楊酸。王薛等研究發現龍膽中含有豆甾醇、熊果酸、齊墩果酸。此外還有龍膽黃鹼、龍膽三糖、秦艽乙素、秦艽丙素等。

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藥理作用

保肝作用

崔長旭等研究發現龍膽草水提取物能明顯抑制由四氯化碳和D氨基半乳糖所致急性肝細胞壞死大鼠血清中谷丙轉氨酶及穀草轉氨酶含量的升高,增加血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的含量,降低丙二醛的含量,從而說明龍膽草水提取物對四氯化碳及D 氨基半乳糖所致大鼠急性肝損傷具有保護作用。王國英等研究發現龍膽苦苷具有保肝作用。

抗腫瘤作用

郭海鳳以小鼠S180肉瘤為模型,研究關龍膽乙醇提取物的抗腫瘤作用,研究結果表明關龍膽乙醇提取物具有較好的腫瘤抑制作用。羅明志等研究發現10和0。 1μmol/L的龍膽苦苷對人肝癌細胞具有殺傷效應,結果表明龍膽苦苷對異常肝細胞具有殺傷作用。陳雷研究發現龍膽苦苷及其衍生物體外可以抑制人肺腺癌細胞株A549的活性。

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抗炎鎮痛作用

陳雷等採用小鼠醋酸扭體法和熱板法研究龍膽苦苷鎮痛藥理作用,發現龍膽苦苷對急、慢性炎症反應有抑制作用,對熱和化學刺激引起的疼痛反應有明顯的鎮痛作用。陳長勳等研究發現龍膽苦苷對炎症早期滲出具有一定的抑制作用。程渝等研究發現龍膽草水提物對大鼠細菌性和黴菌性陰道炎具有改善作用。

抗病毒及其他作用

田冶等研究發現龍膽水提液的半數中毒濃度為 15。25g/L,抑制呼吸道合胞病毒的半數有效濃度為1。07g/L,治療指數為14。25,且對呼吸道合胞病毒的抑制作用存在明顯的量效反應關係(P< 0。01),結果表明龍膽水提液在海拉細胞中對呼吸道合胞病毒有明顯的抑制作用。此外,龍膽還具有健胃、升血糖、興奮中樞神經系統 、利尿等作用。

龍膽酵素

目前,以龍膽草為原料發酵製作酵素的試驗研究較少。陶宏兵等以龍膽草為發酵底物,利用微生物的發酵代謝作用,以龍膽苦苷為評價指標,對龍膽草進行深層次的加工製備成龍膽酵素,採用自由基清除和透明質酸酶抑制試驗,驗證其功效,為豐富龍膽草資源的化妝品應用及酵素新產品的開發提供理論依據。

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發酵條件對龍膽酵素中龍膽苦苷含量的影響

為確定龍膽酵素髮酵的各個關鍵引數,選擇菌 株組合(A)、發酵溫度(B)及發酵時間(C),進行3因素3水平L9(33)正交試驗,以龍膽苦苷含量作為 龍膽酵素髮酵工藝引數的評判指標,結果見表1。

表1 龍膽酵素髮酵工藝最佳化正交試驗結果

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菌株組合、發酵溫度及發酵時間這3 個因素對應的極差(R)為RC>RB>RA,從而得知影響龍膽酵素髮酵的主次因素為發酵時間>發酵溫度>菌株組合。由極差分析可知,龍膽酵素髮酵的最佳方案為A3B2C2,即發酵菌株為釀酒酵母+植物乳桿菌、發酵 溫度為30℃ 、發酵時間為72h。在此條件下重複驗證3次,結果表明,龍膽酵素的龍膽苦苷含量達(1823 ± 21)μg/mL,此條件下的酵素營養、抗敏舒緩效果更佳。

龍膽酵素對透明質酸酶的抑制作用

透明質酸酶是能特異性分解透明質酸(HA)的 一種蛋白水解酶。HA是構成細胞外和細胞間基質的主要成分,被分解後會引起細胞脫顆粒和介質滲漏,導致速髮型過敏反應的發生。

龍膽酵素對透明質酸酶的抑制作用如圖1所示。龍膽酵素對透明質酸酶的抑制率隨濃度的增加而增加,當龍膽酵素濃度低於5%時,抑制率與濃度呈線性關係,隨著濃度的增大而增大。當龍膽酵素濃度高於5%時,抑制率隨濃度增加的速率會減慢。當龍膽酵素濃度達到5%時,對透明質酸酶抑制率達89。2% 。

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龍膽酵素可以抑制透明質酸酶活性,減少HA的分解,具有一定的抗敏止癢的功效。

抗氧化能力

DPPH清除能力

DPPH是一種穩定的氮中心自由基,在517nm處有較強吸收值,通常被用來評估檢測物質的抗氧化性。IC50指自由基清除率為50%時對應的樣品濃度,該值與物質的抗氧化能力呈反比關係。圖2為不同濃度的龍膽酵素對DPPH自由基的清除能力。龍膽酵素對DPPH自由基清除率從23。5%上升到77。5% 。經計算,龍膽酵素DPPH自由基的IC50為5%。PHILIPPEM等研究表明,發酵物質對自由基清除率表現出差異受原料、微生物和發酵液代謝產物的影響。

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·OH和O2-.清除能力

·OH和O2-。是機體再代謝過程中產生的自由基,與機體的衰老有密切關係。圖3和圖4分別為不同濃度龍膽酵素對·OH和O2-。清除能力的變化趨勢。龍膽酵素對·OH的清除率從28。8%上升到70。2%,對·OH的IC50為11% ;龍膽酵素對O2-。清除率從7。01%上升到74。1% ,對O2-。的IC50為16%。JIANG等研究表明,黃酮類化合物對·OH和O2-。有較好的清除能力,其清除能力取決於芳香環上羥基的數目和位置。

抗腫瘤中草藥:龍膽草

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在體外抗氧化能力試驗中發現,龍膽酵素的抗氧化活性較好。這可能是因為,在發酵過程中,龍膽酵素本身含有抗氧化成分如Vc等。除此之外,發酵過程中微生物使原料中的功能成分進行轉化,多種功能成分的協同作用使其總抗氧化活性增強,但其具體的生理作用仍需進一步的研究。

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結論

採用正交實驗最佳化龍膽酵素的發酵工藝,確定最終的發酵工藝為菌株組合釀酒酵母加植物乳桿菌1:1、接種量10% 、發酵溫度30℃ 、發酵時間72h。在此最佳化工藝條件下,發酵液龍膽苦苷含量達到(1823 ± 21)ug/ml,其透明質酸酶抑制率、DPPH、·OH和O2-·自由基的清除能力能達到89。2%、 77。5% 、70。2%和74。1%,表明該工藝下發酵液

具有很好的抗敏和抗氧化功效,

為開發新型龍膽酵素化妝品酵素新產品的開發提供理論依據。

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