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解螺旋公眾號·陪伴你科研的第2714天
如何養死細胞
養細胞太難，難於上青天。本人實驗室萌新一枚，進實驗室時間不長，但養死了不少細胞，耽誤了課題進展，錯失了發SCI最好的時機，應導師要求，
我總結出了一千零一種養死細胞的慘痛方法，附帶實驗室造汙攻略。
本人經歷過的養死細胞情況如下：
培養基種類不對，死了
血清濃度不對，死了
血清質量不行，死了
傳代時胰酶消化時間太長，死了
用槍吹得太猛，死了
細胞長得太滿，死了
忙於戀愛，好幾天不去看細胞，死了
一天把細胞拿出來看好多次，死了
傳代次數太多，細胞老去，死了
傳細胞時，光顧著和同門聊劇，細菌汙染了，死了
離心轉速太高，死了
離心時間太長，死了
培養瓶或細胞板反覆用，貼壁性不好，死了
分瓶時細胞密度太低，死了
培養瓶拿燈烤的太熱，死了
培養瓶瓶蓋擰太緊，死了
培養箱太熱了，死了
培養箱太乾了，死了
培養箱沒二氧化碳了，死了
實驗室停電了，死了
黑膠蟲來襲，死了
還有更可怕的，還是第一千零一種死法~
實驗室來了新人，死了
本人實在不才，一千零一種養死細胞的經歷，我全攤上了。接下來，我應導師的再三逼迫，
從實驗根源上日常操作中開始檢討，我在實驗室犯過的七宗罪，（由於篇幅有限，先更七宗罪）
以此祭奠被我害死的細胞，順便給實驗室萌新敲個警鐘。檢討如下：
1
第一宗罪：
無菌觀念薄弱，穿戴不
規範
首先，我要反思下我進實驗室的懶惰和僥倖心理，有時候進細胞房懶得換鞋，懶得戴口罩，甚至不戴手套，帽子。
我知道，換鞋是為了隔離真菌。戴口罩是為了防止口腔支原體汙染細胞。不戴手套，根本就清除不掉手上的細菌真菌，我明知，以上懶惰造成的不規範行為，是細胞房的大忌諱，還故犯，實屬罪加一等。
2
第二宗罪：實驗用品亂擺放
生物安全櫃裡操作時，門前最忌諱堆一堆雜七雜八的東西，然而，我的槍頭盒、血清、管子，培養皿、移液器、酒精噴壺、酒精燈，堆積如山，我承認我沒有好好整理它們。
我知道，一旦它們堵住了安全櫃門前的出風口，就會有雙重不良影響。我試過，這樣子實驗操作起來會容易手忙腳亂，導致動作幅度過大，擾亂氣流。
其次是，這些堆積的實驗用品一旦擋住風口，也會擾亂生物安全櫃的氣流，氣流變化會導致外部不潔淨的空氣流入，也同樣會導致生物安全櫃的潔淨作用失效。
3
第三宗罪：亂用紫外線和酒精滅菌
我明知，紫外和酒精最多隻能滅細菌，對真菌傷害很小。我不該不戴手套，僅用噴壺噴手。我知道，超淨臺要儘量要用酒精棉球而不是用酒精噴壺，因為用酒精棉球的話，可以在滅菌的同時把菌體從手上擦下去，而噴壺只能短暫的滅了下菌而已。
所以，我以後一定要改掉這個毛病，多用棉球，少用噴壺。
4
第四宗罪：不定期清理水浴鍋
我發現，水浴鍋是實驗室比較容易忽視的一種存在，復甦細胞的時候，37℃對細菌真菌來說就是溫床。復甦細胞後，溼漉漉的凍存管，任我再怎麼噴酒精也並沒有什麼意義了。
所以，我發誓以後一定要，定期清潔水浴鍋，在清潔時務必加一些抑菌劑。注意：我不是要往裡面加雙抗，水浴鍋裡要加2%的硫酸銅，雖然這比較容易腐蝕水浴鍋。總之，一定要定期清潔。
5
第五宗罪：疏於管理導致水盤汙染
我深知，培養箱的水盤坐擁37℃溫床的水環境，水盤裡若是飄著特別大的一塊塊黴斑，一汙染就一箱子全報廢了，所以，我將謹記導師教誨，培養箱要定期用0。1%的新潔爾滅或者84清洗，交替使用，防止微生物耐藥。
預防水盤汙染也很重要，水盤中加入飽和的磷酸氫二鈉可以有效預防細菌真菌，但是需要定期加入去離子水防止析出。
6
第六宗罪：滅菌滅不好
我知道，細胞房所有在用的槍頭，必須要經過溼熱滅菌，用報紙包裹好槍頭，這樣做是因為滅菌鍋一般在細胞房外面，所以要保證內部槍頭盒潔淨。
烤乾是為了防止內部有水分，當我開啟槍頭盒後，有水的地方更容易被黴菌的孢子所接觸附著，也就更容易汙染，所以，滅菌滅不好，是我的大錯。我熟讀並背誦下了這個滅菌法則，如若再不按規範操作，我直播吃手機。
7
第七宗罪：細胞汙染了不搶救
明知實驗室條件有限，懷疑細胞汙染了，我從來不搶救，實在是不懂事，為了表達我的歉意和悔改的決心，我總結出了細胞汙染後的急救方法，順便給學弟學妹參考，各位且背且珍惜。
首先要判斷汙染源，一旦發現細胞有汙染的跡象或已汙染，立即判斷可能的汙染源：有無操作不當？培養基、胰酶、PBS等顏色、澄清度是否正常？
其次要及時處理，若確定現有的培養基、胰酶、PBS可用，則繼續使用；若無法確定則新配完全培養基、PBS、胰酶，原有的液體在確定是否汙染後再做處理。
如果是黴菌汙染，在以PBS潤洗2~3遍後換液，無需加入高濃度雙抗。培養48h後汙染再次出現時，再另行加入即可。
如果是真菌汙染，在PBS潤洗、換液後可加入兩性黴素B（兩性黴素B有細胞毒性，不推薦使用），也可加入300μg/mL氟康唑培養，汙染控制後改用150μg/mL培養2~3代
如果懷疑是支原體汙染，則可進行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑。也可購買環丙沙星注射液，於超淨臺內開啟直接新增到培養基中，以20μg/mL濃度2代後改用10μg/mL濃度持續培養約2周。
不過，我還是堅持認為，如若條件允許，細胞汙染後最好的處理方式是：丟棄！！！
@所有細胞新手
我相信犯了以上這些養細胞罪狀的實驗菜狗，不止我一個人，不止我一個人，細胞培養中的常面臨的BUG也遠不止這些，所以，今天為了給我的檢討收尾，幫大家解決細胞新手面臨的種種難題，預防未來更多的細胞被我們誤傷，耽誤我們發SCI。
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最後，祝大家的細胞寶寶都健康成長，積極獻身於偉大的實驗事業！
大家對細胞培養方面還有什麼想要了解的，都可以留言中告訴我們哦~
我們將線上為各位答疑解惑！
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撰文丨解螺旋
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